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基因敲除细胞系
 
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技术原理

  CRISPR/Cas9Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。在这一系统中,sgRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA 进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑,目前华夏凯奇已经成功将此技术应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备,以及条件性敲除(Loxp系统)模型的制备。
   
   目前华夏凯奇采取优化过的野生型Cas9双切口Cas9nOptimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用优化过的双切口Cas9n(OCASn)可以将脱靶效应降到最低。

 

(一)基因敲除细胞系的制备
1.细胞预实验(检测细胞转染效率、生长速度)。
2.gRNA靶点设计:在要敲除的基因上设计gRNA靶点。
3.检测gRNA靶点内源活性:我们将在基因敲除位点附近测试3-6对靶点来检测gRNA活性,若找不到合适的gRNA靶点,技术服务终止,客户支付到该步骤费用。
4.构建基因敲除细胞系, 筛选单细胞并培养获得细胞株。
5.基因型鉴定及RT-PCR检测。
 
 

     

 

(二)客户须知

1、细胞系工程改造定制服务

产品编号

敲入/敲除细胞系

定点/非定点基因敲入细胞系

单克隆/混合克隆

是否好转染

服务价格

服务周期

0006A

基因敲除细胞系

定点基因敲除细胞系

混合克隆

询价

4-8

0006B

询价

4-8

0006C

单克隆

询价

6-10

0006D

询价

6-10


 

备注:

1.客户提供信息:物种、目的基因序列或目的基因ID     
2.客户提供材料:目标细胞系。  
 
 
 
 
 
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