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技术原理
    CRISPR/Cas9Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。在这一系统中,sgRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA 进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑,目前华夏凯奇已经成功将此技术应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备,以及条件性敲除(Loxp系统)模型的制备。

     目前华夏凯奇采取优化过的野生型Cas9双切口Cas9nOptimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用优化过的双切口Cas9n(OCASn)可以将脱靶效应降到最低。

 

 

H11位点定点敲进模型

    H11位点(也叫Hipp11)位于小鼠第11号染色体,是 Eif4enif1与Drg1 这两个基因之间的一个位点,由于H11位点位于两个基因之间,外源基因插入后內源基因表达的影响很小同时H11位点所在的Eif4enif1与Drg1这两个基因的侧翼序列区域具有广泛的空间和时间EST表达模式,能够使整合在此的外源基因受指定启动子的驱动而稳定表达。该位点的纯合敲入小鼠可正常发育和繁殖。
 
    利用CRISPR/cas9系统可以在H11位点构建条件性基因过表达小鼠模型,广泛型强启动子pCAG与外源目的基因cDNA之间用loxP-stop-loxP结构隔开,只有与组织特异性Cre工具鼠交配后,才会在特异细胞或组织中表达目的基因。

 

 

研发周期

4-7个月

 

技术优势

  • 按设计精准插入;
  • 基本保证过表达;
  • 遗传稳定性高;
  • 无需筛选,直接用于分析。

 

 

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