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基于Loxp的条件性敲除
 
通过将Loxp小鼠和组织特异性Cre, 或他莫昔芬(Tamoxifen)可诱导的Cre-ER小鼠杂交来达到在特性组织或者特定时间敲除你感兴趣的基因。
 
目前的条件性敲除小鼠主要是基于Cre-LoxP系统的。Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组 成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除。
 

传统的条件性敲除

基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。

传统方法,首先要在胚胎干细胞的基因组中引入LoxP序列,这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。
第二步,通过Cre介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。在细胞水平上,可以用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞,通过识别 LoxP位点将抗性标记基因切除;在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交,筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。 将Cre基因置于可诱导的启动子控制下,通过诱导表达Cre重组酶而将LoxP位点之间的基因切除(诱导性基因敲除),实现特定基因在特定时间或者组织中 的失活。
一般需要一年以上的时间,价格在15-20万不等。

华夏凯奇基于Cas9系统的条件性敲除

原理上和传统的条件性敲除类似,差别在于华夏凯奇利用Optimized Cas9/CRISPR System(OCAS)技术在基因组上加入loxp序列,可以快速获得Loxp位点插入的小鼠。
目前我们一般只需要4-5个月。价格也比传统方法大大降低。

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